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四环冻干机—生物制品和生物组织冻干技术(二)

更新时间:2023-03-24 点击次数:460

5.2

菌种和疫苗的冻干

在众多的菌种保藏方法中,冷冻真空干燥法所提供的低温、真空条件,可使所保藏的菌种保藏更长的时间。例如,王永成等人对布氏菌株的冻干进行了研究,将冻干保存了14~19年的11株布氏菌株接种、培养后,对其进行观察,全部存活。另有报道称冻干保存鼠疫菌25年。

而且在冻干菌株被使用时,只需提供水分使之复水即可再生,方便实际应用。冻干菌株保藏效果也较其他方法*。

5.2.1醋酸菌菌种冻干

邵伟等人研究了醋酸菌菌种的冻干。将30℃培养2~3天的醋酸菌斜面,分别用3mL的5%、10%和20%的无菌脱脂牛奶洗下,制成菌悬液,充分混匀,用无菌吸管加入无菌安瓿管中。并将它们分2组分别置于-30℃或-60℃预冻2h,然后取出进行冷冻干燥。

冷冻干燥机接通电源后,在温度降至-40℃时,放入装有菌体的安瓿管,开启真空泵,冻干机经过3~5min温度降至-55℃,待真空表读数稳定不变后,保持4~8h,然后,将安瓿管封口保存。将经不同方式处理的醋酸菌保藏种置于4~10℃保藏一年后取出,用无菌生理盐水溶解制成菌悬液,稀释成不同浓度,再分别涂布于3个培养皿,培养72h观察计数,取其平均值。预冻温度对冻干菌的影响见图5-1。

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图5-1表明,从细胞存活数的计数统计来看,-60℃预冻的效果相对要好。这是因为菌悬液在-30℃预冻时,其温度已降到冰点以下,但结冰不够坚实,真空干燥时易使菌悬液沸腾,菌体细胞受损失较多。而在-60℃预冻时,结冰速率大且坚实,细胞损伤较少。

图5-2是-60℃预冻并冻干的醋酸杆菌,经不同保藏方式,在不同保藏时间后的活菌数比较。

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图5-2表明,醋酸菌在一年的保藏期内,冻干保藏的菌种其产酸能力下降较少,基本能保持稳定,而斜面保藏和液体保藏的菌种其产酸能力下降梯度大。可见,用冷冻干燥法保藏的醋酸菌在保持产酸能力方面有明显的优势。





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